Аминокислоталар ишлаб чиқариш биотехнологияси

Аминокислоталар ишлаб чиқариш 
биотехнологияси                 Аминокислоталар
•
      Аминокислоталар  ё   кислоталарининг ғ
осиласи  бўлиб,  улар  таркибида  карбоксил 	
ҳ
группа  (-СООН)  билан  бир  аторда  амин 	
қ
группа  (-NH2)  ам мавжуд. 	
ҳ
•
   NH2  группа  амма ва т 	
ҳ қ α -углерод атомидан 
ўрин  олади.  α -аминокислоталарнинг  умумий 
формуласи  уйидагича: 	
қ
•
                                         
•
                                        R
  H
2 N    С H COOH                        •
            озирда  саноат  ми иёсида Ҳ қ
микробиологик ва кимёвий усулда 29 турдаги 
аминокислоталар  ишлаб  чи арилмо да  ва 	
қ қ
дунё  бозорда  аминокислоталарнинг  64%-ини 
L- глутамин  кислота    ташкил  этмо да.  Ўрин 	
қ
алмашинмайдиган  аминокислоталардан  D, 
L- метионин,  L- лизин,  L- триптофан,  ва  L-
треонин  кенг  ми иёсида  саноатда  ишлаб 	
қ
чи ариш йўлга  ўйилган. 	
қ қ
•
      Аминоксилоталарни  кенг  ўлланилиш 	
қ
со аларидан  бири  бу  ози -ов ат  саноатидир. 	
ҳ қ қ
                       Аминокислоталардан фойдаланилиш соҳалари
•
Аминокислоталардан  хал   хўжалигининг қ
турли со аларида кенг фойдаланиши Япония 	
ҳ
давлати  мисолида  кўриш  мумкин.    Японияда 
ишлаб  чи ариладиган  аминокислоталарнинг 	
қ
65%-и  ози -ов ат  саноатида,  18%-и 	
қ қ
чорвачиликда,  15%-и  медицинада  ва  2%-и 
турли  со аларда  ўлланилади.  Айни  ва тда 	
ҳ қ қ
жа он  ми иёсида  аминокислоталар  ишлаб 	
ҳ қ
чи ариш  йилига  бир  неча  миллион  тоннани 
қ
ташкил этмо да.   	
қ                     Глутамин кислота
•
        L- глутамин  кислота  ози -ов ат  саноатида қ қ
таъм  берувчи  ва  консерваловчи  агент 
сифатида  ўлланилади.  Глутамин 	
қ
кислотасининг  натрийли  тузи  таъм 
оширувчи  бўлиб,  уни  гўштли,  сабзавотли 
таомлар  тайёрлашда,  шунингдек,   
ма сулотларни  консервалаш,  музлатиш  ва 	
ҳ
са лаш  муддатини  узайтиришда 
қ
ўлланилади.  Глутамин  кислота  ва  унинг 	
қ
тузларининг  кўпро   ми дори  аччи   ва  шўр, 	
қ қ қ
камро  ми дори эса ширин таъмга эга.	
қ қ                     •
   Глутамин кислотанинг суткалик меъёри 1,5 г, ози -қ
ов ат  ма сулотларидаги  максимал  даражаси  –  10 	
қ ҳ
мг/кг. 
•
      Табиий  глутамин  кислотаси  инсон  организмида 
о сил  ва  углевод  алмашиниши,  оксидланиш 	
қ
жараёнларини  ростлаш,  амиакни  за арлилигини 	
ҳ
камайтириш  ва  организмдан  нафас  етишмасликни 
олдини  олиш  (чидамлиликни  ошириш),  пурин  ва 
пиримидин  неклеотидлар,  амино андлар  ва  фолин 	
қ
кислоталари синтезида му им роль ўйнайди. 	
ҳ
•
     Глутамин кислотаси болалар ози а ма сулотлари 	
қ ҳ
ишлаб чи аришда  ўллаш та и ланади.  	
қ қ қ қ                     ЛИЗИН
•
      Сўнгги  йилларда  ози -ов ат  ма сулотларини қ қ ҳ
лизин  билан  бойитиш  бўйича  кенг  ишлар  амалга 
оширилмо да.    Кўплаб  ўсимлик  ма сулотлари  (о  	
қ ҳ қ
нон,  ёрма,  макарон  ма сулотлари)да  лизин 	
ҳ
ми дори  жуда  кам.  Ушбу  ма сулотларга  лизин 	
қ ҳ
ўшилиши  ма сулотларнинг  озу авий  ийматини 	
қ ҳ қ қ
оширади.  Ози а  ма сулотларида  лизин 	
қ ҳ
етишмаслиги  болалар  со ли ига  салбий  таъсир 	
ғ ғ
кўрсатади.  Японияда  олиб  борилган  кўп  йиллик 
тажрибалар  шуни  кўрсатдики,  лизин  (треонин 
билан  бирга)  болаларнинг  а лий  ривожланишига 	
қ
ижобий таъсир кўрсатади.                      Алмашинмайдиган аминокислоталар
•
         ЛИЗИН
•
         МЕТИОНИН
•
         ТРЕОНИН
•
         ИЗОЛЕЙЦИН
•
         ЛЕЙЦИН
•
         ВАЛИН
•
         ТРИПТОФАН
•
         ФЕНИЛАЛАНИН
•
         АРГИНИН
•
         ГИСТИДИН                      Ўрин алмашинадиган аминокислоталар
•
     ГЛИЦИН
•
     АЛАНИН
•
     СЕРИН
•
     ПРОЛИН
•
     ЦИСТЕИН
•
     ТРИОЗИН
•
     ГЛЮТАМАТ КИСЛОТА
•
     ГЛЮТАМИН
•
     АСПАРГИН КИСЛОТА
•
     АСПАРГИН                     Аминокислоталар олиш усуллари
•
  О СИЛ СА ЛОВЧИ СУБСТРАТЛАРНИ Қ Қ
ПАРЧАЛАШ  
•
  КИМЁВИЙ СИНТЕЗ
•
  КИМЁВИЙ-ЭНЗИМАТИК СИНТЕЗ
•
   МИКРОБИОЛОГИК СИНТЕЗ                      1. Оқсил сақловчи субстратларни парчалаш
•
       Аминокислоталар о сил са ловчи субстратларни қ қ
ферментатив ёки кислотали гидролизлаб олинади.
•
     О сил са ловчи субстратлар:	
қ қ
•
      Гўшт
•
      Сут
•
      Дуккакли экинлар дони (соя) 
•
      Методнинг камчилиги:
•
       Хом ашёнинг  имматлиги ва етишмаслиги	
қ
•
            Ушбу  усулдан  хом  ашё  яро сиз  бўлганда 	
қ
фойдаланилади (ишлаб чи ариш чи итлари)	
қ қ
•
        Хитойда  инсон  сочидан  3000  тонна  цистеин 
ишлаб чи ариш йўлга  ўйилган.	
қ қ                     2. Кимёвий синтез
•
Аминокислоталар  кимёвий  синтез  усулида 
ноозу авий,  минерал  хом  ашёдан  бир  неча қ
этапларда олинади.    
•
      Усулнинг камчилиги:
•
    жараён  ю ори  арорат  ва  босимда  олиб  борилади 	
қ ҳ
ва  имматба о жи озлар бўлиши талаб этилади. 	
қ ҳ ҳ
•
Дастлабки  бирикма  за арли  ва  ишчилар 	
ҳ
саломатлигига салбий таъсири бўлиши мумкин. 
•
Синтез  натижасида  за арли  чи итлар  осил 	
ҳ қ ҳ
бўлиши  ва  атроф  му итни  ифлослантириши 
ҳ
мумкин.                     Кимёвий-энзиматик синтез
•
Синтез  жараёни  2  этапда  олиб  борилади.    Биринчи 
бос ичда кимёвий синтез усулида аминокислотанинг қ
дастлабки  ма сулоти  масалан  карбон  кислота 	
ҳ
олинади.  Иккинчи  этапда  микроорганизм 
фермантлари  таъсирида  дастлабки  ма сулот 	
ҳ L -
аминокислотаси  осил  илинади.	
ҳ қ
•
     Усулнинг камчилиги:
•
      Биринчи бос ич кимёвий синтезда олиб борилади;	
қ
•
          Ма сулот  олиш  жараёнининг  имматлиги  ва 	
ҳ қ
жараённиг мураккаблиги;
•
                         3. Микробиологик синтез
•
    Микробиологик  синтез  асосида  кўплаб  аминокислоталарни  олиш 
айни ва тда исти болли ва и тисодий самарали усул  исобланади.қ қ қ ҳ
•
Лизин одам ва  айвонлар организмида  атор ўта му им биокимёвий 	
ҳ қ ҳ
функцияларни  бажаради:  ужайрада  кальций  транспорти,  ов ат 	
ҳ қ
азм  илиш  ферментлари  секрециясини  ва  умумий  азот  нисбатини 	
ҳ қ
оширишни таъминлайди ва  .к.	
ҳ
•
Лизиннинг  ози   ов ат  саноатида  ўлланилиши  ма сулотларнинг 	
қ қ қ ҳ
сифатини  яхшилаб,  уларнинг  биологик  ийматини  оширади. 	
қ
Шунингдек,  лизин  айвонлар  ози асидаги  энг  тан ис 	
ҳ қ қ
аминокислоталар  исобланади.  айвонлар  ози а  рационига 	
ҳ Ҳ қ
лизиннинг  0,1-0,4%  ми дорида  ўшилиши  ози анинг  ийматини 	
қ қ қ қ
кескин оширади ва шу билан бирга уларнинг сарф бўлиш ми дорини 	
қ
ис артиш имконини беради.	
қ қ
•
Лизин  синтез  илувчи  продуцент-микроорганизмлар,  ауксотроф 	
қ
бактерияларнинг  Brievibacterium ,  Micrococcus ,  Corynebacterium    
каби гомосеринга му тож мутант туркумлари  исобланади. 	
ҳ ҳ                     Лизин ишлаб чи аришқ
•
Саноат  асосида  лизин  ва  бош а  хил  аминокислоталарни 	
қ
олиш,  атъий  режимдаги  асептик  шароит,  стерил  ози а 	
қ қ
му ити  ва  продуцентнинг  тоза  культурасидан  фойдаланишни 	
ҳ
талаб  этади. 
•
Лизин  олишнинг  технологик  жараёнлари  уйидаги 	
қ
бос ичлардан иборат:	
қ
•
экиш материалини олиш;
•
ози а му итини тайёрлаш ва стериллаш;
қ ҳ
•
барча  ускуналар,  коммуникация  ва  авони  тайёрлаш  амда 	
ҳ ҳ
стериллаш;
•
ферментация;
•
L-лизинни ажратиш.
•
Лизин  чи арувчи  биокимёвий  заводларда  экиш  материалини 	
қ
тайёрлаш даврий усулда амалга оширилади.                     •
    Дастлабки  культура  ГПА  (гўшт  пептонли  агар) 
атти   ози асида  пробиркаларда  28-30қ қ қ 0
С 
ароратда  бир  сутка  давомида  ўстириб  олинади. 
ҳ
Ўсган  культуралардан  микроорганизмлар 
суспензияси  стерил  сую   ози а  му итига 	
қ қ ҳ
(кольбаларга)  ўтказилади  ва  микробиологик 
тебратгичда  (180-200  тез/мин)  бир  сутка  давомида 
29-30 0
С  ароратда ўстирилади. 	
ҳ
•
Буни  оналик  экиш  материали   деб  ам  аталади. 	
ҳ
Сўнгра  оналик  экиш  материали  тайёрлаш 
колбаларидан  культуралар  экиш  колбаларига 
олинади,  бунда  колбадаги  ози а  му итининг  5% 	
қ ҳ
ми дори  ажмида  оналик  экиш  материали 	
қ ҳ
солинади.                      Экиш материалини олиш
•
  Экиш  материалини  олиш  учун  ози а  му ити  таркиби: қ ҳ
меласса (3-5%), маккажўхори экстракти (2,5-3,0%) ва ош тузи 
са лайди.  рН  7-7,2  гача  бўлиши  HСl  нинг  20%  ли  эритмаси 	
қ
ор али  таъминлаб  турилади.  Инокулятордаги  ози а  му ити 
қ қ ҳ
таркиби  ферментацион  ози а  му ити  таркибига  я инро  	
қ ҳ қ қ
бўлиши  зарур.  Лизин  продуцентларини  ўстириш  учун 
таркибида  меласса,  маккажўхори  экстракти  ёки  бўр  ва 
ўстириш  моддаларини  са ловчи  му итдан  фойдаланилади. 	
қ ҳ
Углероднинг  асосий  манбаси  меласса  бўлиб,  таркибида 
термолабил  компонент  бўлган  сахароза  са лайди,  шунинг 	
қ
учун  уни  ало ида  стериллаш  талаб  этилади.  Меласса 	
ҳ
реакторга  солиниб  доимий  аралаштирилган  олда  80	
ҳ 0
С  гача 
ароратда  издирилади  ва  зарур  ми дордаги  сахароза 	
ҳ қ қ
ми дори  осил бўлгунча сув солинади.	
қ ҳ                     Махсус  ускуналардаги  осил  илинган  меласса  эритмасига  тезда  120-ҳ қ
122 0
С  ароратгача  кучли  бу   юборилади  ва  бу  арорат  ани   ва т 	
ҳ ғ ҳ қ қ
орали ида ушлаб турилади.
ғ
Ози анинг  бош а  компонентлари  аралаштирилиб  аралаштиргич  билан 	
қ қ
жи озланган  реакторга  уйилади  ва  издирилади,  сўнгра  махсус 
ҳ қ қ
ускунада стерилизация  ароратида зарур ва т орали ида ушланиб, кейин 	
ҳ қ ғ
совутилади.
Кўпик  осил  илувчилар  баъзан  ало ида  стерилланади,  бунга  сабаб 	
ҳ қ ҳ
уларни  ози а  му итларга  нисбатан  ю ориро   арорат  ва  босимдан 	
қ ҳ қ қ ҳ
стерилланишидир.
Лизин  олиш  жараёнлари  атъий  асептик  шароитни  талаб  илганлиги 	
қ қ
учун  барча  ускуналар,  реакторлар,  коммуникациялар  ва  ферментацияга 
бериладиган  аво  стерилланиши  зарур.  Ускуналар  ва  комуникациялар 	
ҳ
135-140 0
С  ароратда  ўткир  бу   босими  остида  амалга  оширилади.  Бунда 	
ҳ ғ
стерилизациянинг  “совутиш”  усулидан  яъни  бактериоцид газлар (этилен) 
ва кимёвий реагент эритмаларидан (шакллин, хлор са ловчи бирикмалар 	
қ
ва  .к.)  фойдаланиш  мумкин.  Сову   стериллаш  амалга  оширилгандан 	
ҳ қ
сўнг кимёвий реагентлар  олди лари стерил сувда ювиб ташланади.	
қ қ                     Ферментация
•
         Лизин продуцентларини саноат асосида ўстириш 50-100м 3
  ажмли ҳ
ферментёрларда  даврий  ўстириш  усулида  амалга  оширилади. 
Ферментёрга  солинган  стерил  ози а  му итининг  5-6  фоизи  ми дорида 	
қ ҳ қ
экиш  материали  солинади.  Ферментёрнинг  умумий  бандлик  бирлиги 
0,75 ни ташкил этиши лозим. Ферментаторга экишдан кейин бирданига 
стерил  аво  юборилади  ва  50	
ҳ 0
С  ароратгача  издирилади.  1  ажм  аво 	ҳ қ ҳ ҳ
1  л  ози а  му ити  ажмига  минутига  0,12-0,13  МПа  босимда  бериб 	
қ ҳ ҳ
турилади.
•
         Ферментация жараёни 28-29 0
С  ароратда узлуксиз аралаштириш ва 	
ҳ
аэрация шароитида 48-72 соат давомида олиб борилади.
•
         Кўпиксизлантирувчи воситалар даврий (ва ти-ва ти билан)  ўшиб 	
қ қ қ
турилади,  ози а  му ити  рН  даражаси  эса  ва ти-ва ти  билан  25% 	
қ ҳ қ қ
аммиак  эритмаси  ёки  15%  ўювчи  калий  эритмасидан  ўшиш  ор али 	
қ қ
мўътадиллаштирилиб  турилади.  Ферментация  орадан  58-72  соат  ва т 	
қ
ўткач  тугалланади  ва  культурал  сую лик  ма саддаги  ма сулотни 	
қ қ ҳ
ажратиш учун кейинги бос ичга юборилади.	
қ                     L    лизинни ажратиш
•
Культурал  сую ликдан  тайёрланишига  бо ли   олда қ ғ қ ҳ
турли  хил  микробиологик  препаратлар:  лизиннинг 
сую   концентрати  (ЛСК),  лизиннинг  уру   ози а 	
қ қ қ қ
концентрати (ЛОК) ва кристалл лизин олиш мумкин. 
Ушбу  препаратларни  олиш  технологиялари  ар  хил. 	
ҳ
2.1-чизмада  лизиннинг  уч  хил  препаратлари:  СЛК, 
ЛОК ва кристалл лизин олиш акс эттирилган.
•
Культурал сую ликдан 10-13%  уру  модда са ловчи 	
қ қ қ қ
микробиологик  концентратлар  (СЛК  ва  ЛОК)  олиш 
учун  рН  даражаси  5,0  гача  хлорид  кислотада 
нордонлаштирилади ва лизинни бар арорлаштириш 	
қ
учун 0,15% натрий бисульфит эритмаси  ўшилади.	
қ                     Сўнгра  вакуум-бу лантириш  ускунасида  бар арорлаштирилган ғ қ
культурал  сую лик,  уру   модда  ми дори  35-40%  олгунча 	
қ қ қ қ қ
бу лантирилади.  Олинган  сую   лизин  концентрати  айвонлар 	
ғ қ ҳ
ози аларини бойитиш учун  ўлланилиши мумкин.	
қ қ
уру   концентратни  ( ЛК)  олиш  учун,  сую   концентрат  (СЛК), 	
Қ қ Қ қ
исси лик  остида  пуркаб  уритгич  мосламада  5-6%  намлик 	
қ қ
огунча  уритилади.  уру   ози а  лизин  концентрати  жуда 	
қ қ Қ қ қ
гигроскопик  бўлади,  шунинг  учун  уритилгандан  сўнг  тезда 	
қ
полиэтилен  опчаларда  адо лаш  лозим.  Сую   лизин 	
қ қ қ қ
концентратини  суяк  уни,  ози а  ачит илари,  бу дой  кепаги  ва 	
қ қ ғ
бош алар  билан  биргаликда  уритилганда  кичикро  	
қ қ қ
гигроскопик  ва  сочилувчан  ози а  лизин  концентратини  олиш 	
қ
мумкин.
Кристалл  лизин  культурал  сую ликдан  ион  алмашинув 	
қ
усулларидан  фойдаланилиб  ажратилади.  Культурал  сую ликдан 	
қ
биомасса центрифугалаш ёки фильтрлаш ор али ажратилади.	
қ
Лизин  фильтратдан  КУ-2  ёки  КБ-4П-2  маркали  ион  алмашинув 
смоласида сорбцияланади.