Biotexnologik yondashuvlar asosida berberis integerrima bunge ko‘chatlarini yetishtirish va ikkilamchi moddalar olish texnologiyasi

    Mavzu:  BIOTEXNOLOGIK	 YONDASHUVLAR	 ASOSIDA	 
BERBERIS INTEGERRIMA  	
BUNGE	 KO CHATLARINI	 	ʻ
YETISHTIRISH	
 VA	 IKKILAMCHI	 MODDALAR	 OLISH	 
TEXNOLOGIYASI D ISSERTАTSIУАNING  D ОLZАRBLIGI  
Berberis integerrima  Bunge	
 O rta	 Osiyo	 hududlarida	 keng	 tarqalgan	 dorivor	 o simliklardan	 biri	 bo lib,	 qadimdan	 tibbiyotda	 ishlatib	 	ʻ ʻ ʻ
kelingan.	
 Uning	 tarkibida	 alkaloidlar,	 flavonoidlar	 va	 boshqa	 biologik	 faol	 moddalar	 mavjud	 bo lib,	 bu	 moddalar	 yallig lanishga	 qarshi,	 	ʻ ʻ
antibakterial,	
 antioksidant	 va	 gepatoprotektiv	 xususiyatlarga	 ega.	 Xususan,	 o simlik	 tarkibidagi	 	ʻ berberin  	alkaloidi	 tibbiyotda	 yurak-tomir,	 
siydik	
 yo llari	 va	 ovqat	 hazm	 qilish	 tizimi	 kasalliklarini	 davolashda	 keng	 qo llaniladi.	 Biroq,	 ushbu	 o simlikning	 tabiiy	 populyatsiyalari	 	ʻ ʻ ʻ
kamayib
 borayotgani	 va	 ekologik	 omillar	 yetishtirishga	 salbiy	 ta’sir	 ko rsatayotgani	 sababli	 uning	 barqaror	 xomashyo	 manbai	 sifatida	 	ʻ
ta’minlanishi	
 qiyinlashmoqda.
Mavzuning	
 dolzarbligi	 shundaki,	 zamonaviy	 biotexnologik	 yondashuvlar,	 ayniqsa,	 in	 vitro	 sharoitida	 to qimalarni	 ko paytirish	 usullari	 	ʻ ʻ
Berberis integerrima  kabi	
 qimmatli	 o simliklarni	 mikroklonal	 ko paytirish	 imkonini	 beradi.	 Bu	 o simlikning	 genetik	 resurslarini	 saqlash,	 	ʻ ʻ ʻ
qimmatli	
 ikkilamchi	 moddalarni	 olish	 va	 ularni	 sanoat	 miqyosida	 qo llash	 imkonini	 yaratadi	ʻ . In vitro  texnologiyalari	 yordamida	 ushbu	 
o simlikning	
 dorivor	 xususiyatlarini	 o rganish,	 ko paytirish	 va	 barqaror	 ta’minotni	 yo lga	 qo yish	 xalqaro	 farmatsevtika	 sohasida	 talabni	 	ʻ ʻ ʻ ʻ ʻ
qondirish	
 uchun	 dolzarb	 hisoblanadi.
Berberis integerrima  ko‘chatlarini	
 biotexnologik	 usullar	 orqali	 ko‘paytirish	 nafaqat	 ushbu	 o‘simlikni	 saqlab	 qolishga	 yordam	 beradi,	 balki	 
biologik	
 faol	 moddalarni	 olish	 texnologiyasini	 rivojlantirishda	 ham	 muhim	 ahamiyat	 kasb	 etadi.	 Shu	 sababli,	 ushbu	 mavzu	 nafaqat	 ilmiy,	 
balki	
 amaliy	 jihatdan	 ham	 katta	 ahamiyatga	 ega	 bo lib,	 tibbiyot,	 farmatsevtika	 va	 biotexnologiya	 sohalarida	 keng	 qo llanish	 	ʻ ʻ
imkoniyatlarini	
 taqdim	 etadi. TАDQIQОT MАQSАDI  
Berberis integerrima   Bunge  mikroklonal	
 ko‘paytirish	 texnologiyasining	 optimal	 sharoitlarini	 
tanlash,	
 hujayra	 kallusi	 tarkibini	 qiyosiy	 baholashdan	 iborat.
TADQIQOTNING	
 VAZIFALARI

B.  integerrima  regenerentlarini	
 	olish	 	uchun	 	boyitilgan	 	 	MS	 	ozuqa	 	muhitini	 	tayyorlash	 
reglamentini	
 ishlab	 chiqish;

  B.  integerrimani  
iqlimlashtirishning	 	mikroklonal	 	ko’paytirishning	 	optimal	 	sharoitlarini	 
tanlash;

mikroklonal	
 usulda	 yetishtirilgan	 kallusning	 kimyoviy	 tarkibini	 qiyosiy	 baholash;

  B. integerrimani  	
ko chatlarini	 yetishtirish	 biotexnologiyasini	 ishlab	 chiqish.	ʻ Tadqiqotning obyekti	 
va	
 predmeti
Tadqiqot	
 obyekti :	  Q ora	 zirk	 ( B. 
integerrima  Bunge)	
 o simligi.	ʻ
Tadqiqot	
 predmeti :	  B. integerrima 
Bunge	
 ning	  in vitro  	usulda	 ko paytirish	 	ʻ
sharoiti,	
 qo llaniladigan	 ozuqa	 muhit	 	ʻ
tarkibi,	
 kallusning	 kimyoviy	 tarkibi	 
hamda	
 eksplantlarni	 baholashning	 
miqdoriy	
 ko rsatkichlaridan	 iborat.	ʻ      Tadqiqot ishlarining	 ilmiy	 va	 amaliy	 ahamiyati
B. integerrima  kallus	
 to qimalari	 makro-	 va	 mikroelementlar	 tarkibi	 meva	 va	 barglari	 bilan	 	ʻ
qiyosiy	
 tahlil	 qilingan	 hamda	 kallus	 to qimalardan	 biologik	 faol	 moddalar	 olish	 mumkinligi	 	ʻ
asoslangan.B. integerrima  ni	
 mikroklonal	 ko paytirishning	 multipikatsiya,	 ildizlatish	 bosqichlarining	 	ʻ
optimal	
 sharoitlari	 tanlangan;B. integerrima  regenerentlarini	
 olish	 uchun	 foydalaniladigan	 MS	 ozuqa	 muhitining	 
takomillashtirilgan	
 tarkibi	 ishlab	 chiqilgan; Qora zirk	  ( Berberis integerrima  Bunge)
•
Domen :
 Eukariotlar	 (Eukaryota)
•
Olam :	
 O simliklar	 (Plantae)	ʻ
•
Tip :	
 Gulli	 o‘simliklar	 (Magnoliophyta)
•
Sinf :	
 Ikki	 urug‘pallalilar	 (Magnoliopsida)
•
Turkum :	
 Zirko tlar	 (Berberidales)	ʻ
•
Oila :	
 Zirkdoshlar	 (Berberidaceae)
•
Tur :	
  Berberis integerrima  Bunge
•
Forma :	
  Berberis integerrima  Qora zirk	 ( Berberis integerrima  B)ning	 
botanik	
 tavsifi
       Berberis integerrima  Bunge  	
–  qora	 zirk	 hayotiy	 shakli	 bo yicha	 buta	 	ʻ
hisoblanib,	
 balandligi	 4 metrgacha	 bo lgan	 formalari	 uchraydi.	 Qora	 zirk	 	ʻ
(qoraqand)	
 -  zirkdoshlar  oilasiga	 mansub	 bo lib,	 bo yi	 4 metrgacha	 	ʻ ʻ
boradigan	
 sershox	 buta.	 O simlikning	 eski	 shoxlarning	 kulrang,	 yosh	 	ʻ
novdalari	
 qo ng ir	 bo ladi.	 Tikanlari	 uch	 bo lakli.	 Barglari	 teskari	 	ʻ ʻ ʻ ʻ
tuxumsimon,
 cho zinchoq,	 o tmas,	 chetlari	 biroz	 tishli	 yoki	 tekis,	 ularning	 	ʻ ʻ
uzunligi	
 2-6	 sm	 keladi.	 Gullari	 sariq	 rangda	 bo lib,	 gul	 shingili	 shoxlangan,	 	ʻ
ro vaksimon.	
 Mevasi	 qoramtir-binafsha	 rangda	 bo lib,	 ellipsimon	 	ʻ ʻ
ko rinishga	
 ega.	 O	ʻ ʻ simlik	 may	 oyida	 gullab,	 iyun-iyul	 oylarida	 pishadi.	   
Qora	
 zirk	 mevalari	 xalq	 tabobatida	 asab	 faoliyati	 sustlashganda,	 oshqozon-
ichak,	
 sariq	 kasalliklarini	 davolashda	 ishlatiladi.	 Bundan	 tashqari	 undan	 
haroratni	
 pasaytiruvchi,	 ishtaha	 uyg otuvchi,	 o t	 haydovchi,	 yallig lanishga	 	ʻ ʻ ʻ
qarshi	
 vosita	 sifatida	 ham	 foydalaniladi. Qora zirk	 ( Berberis integerrima  B)ning	 dorivorlik	 xususiyatlari;	 Kimyoviy	 tarkibi
•
Ildizi:	
 Alkaloidlar :	 Ildizining	 asosiy	 komponenti	  berberin  	alkaloidi	 bo lib,	 bu	 modda	 yallig lanishga	 qarshi,	 	ʻ ʻ
antibakterial,	
 antifungal	 va	 yurak-tomir	 tizimiga	 ta’sir	 ko rsatuvchi	 xususiyatlarga	 ega.	 	ʻ Berberin :	 1%	 dan	 3%	 gacha	 
(quruq	
 massa	 bo yicha).	ʻ
•
Bargi:	
 Flavonoidlar :	 Barglar	 antioksidant	 xususiyatga	 ega	 flavonoidlar	 bilan	 boy,	 ularga	  kversetin ,	  rutin ,	 va	 
kampferol  	
kiradi.	 Ushbu	 flavonoidlar	 organizmni	 oksidlovchi	 stressdan	 himoya	 qiladi	 va	 yallig lanishga	 qarshi	 ta’sir	 	ʻ
ko rsatadi.	
ʻ  	Flavonoidlar :	 1%	 dan	 2%	 gacha	 (umumiy	 flavonoidlar	 miqdori).
•
Urug’i:	
 Yog	 kislotalari	ʻ :	 Urug lar	 tarkibida	 ko p	 miqdorda	 linol	 kislotasi	 kabi	 yog	 kislotalari	 mavjud	 bo lib,	 ular	 	ʻ ʻ ʻ ʻ
organizm	
 uchun	 foydali	 omega-6	 yog	 kislotalarini	 tashkil	 etadi.	 Bu	 kislotalar	 yallig lanishga	 qarshi	 va	 yurak	 	ʻ ʻ
salomatligini	
 qo llab-quvvatlovchi	 ta’sirga	 ega.	 	ʻ Yog	 kislotalari	ʻ :	 20%	 dan	 30%	 gacha.
•
Mevasi:	
 Vitamin	 C :	 Mevalari	 asosan	 askorbin	 kislotasi	 (vitamin	 C)	 bilan	 boy	 bo lib,	 bu	 modda	 kuchli	 antioksidant	 	ʻ
ta’sir	
 ko rsatadi	 va	 immun	 tizimini	 mustahkamlaydi.	ʻ Qora zirk	 ( Berberis integerrima  B)ning	 urug’lari	 
va	
 novdalarini	 sterillash	 jarayoni
•
Uru g	
ʻ lar	 10	 daqiqa	 oddiy	 suvda,	 30	 daqiqa	 10%	 Domestosda	 
yuvilib,	
 distillangan	 suvda	 6 marta	 chayildi.	 70%	 spirt	 bilan	 
5	
 daqiqa	 sterillanib,	 0,1%	 fungitsidda	 30	 daqiqa	 ishlov	 
berildi	
 va	 steril	 suvda	 yuvildi.	 Keyin	 0,1%	 kumush	 xlorid	 
bilan	
 5 daqiqa	 sterilizatsiyalanib,	 steril	 suvda	 besh	 marta	 
yuvildi.
•
Novdalar	
 10-15	 daqiqa	 suvda,	 keyin	 10%	 Domestosda	 
yuvilib,	
 distillangan	 suvda	 5-6	 marta	 chayildi.	 70%	 spirt	 
bilan	
 1-5	 daqiqa	 sterillanib,	 0,1%	 fungitsidda	 20-30	 daqiqa	 
ishlov	
 berildi	 va	 steril	 suvda	 yuvildi.	 So‘ng,	 0,1%	 kumush	 
xlorid	
 bilan	 5 daqiqa	 sterilizatsiya	 qilinib,	 steril	 suvda	 yana	 
3-5	
 marta	 chayildi.  Qora zirk	 ( Berberis integerrima  B)ning	 urug ‘ larini	 ozuqa	 muhitiga	 o ‘ tqazish.
•
2	
 daqiqa	 davomida	 steril	 qog oz	 sochiqda	 quritildi	 va	 	ʻ
25	
 ×	 145	 mm	 o lchamdagi	 shisha	 naychalarda	 15	 ml	 	ʻ
MS	
 (Murashige	 va	 Skoog,	 1962)	 ozuqa	 muhitiga	 2	 
mg/l	
 konsentratsiyadagi	 BAP	 li	 ozuqa	 muhitiga	 
ekildi.	
 Muhit	 pH	 5,6	 ga	 yetkazildi	 (1	 N	 NaOH	 yoki	 
HCl	
 bilan)	 va	 keyin	 agar	 qo shildi.	 Muhit	 121	 °C,	 	ʻ
108	
 kPa	 bosimda	 20	 daqiqa	 davomida	 autoklavda	 
sterilizatsiya	
 qilindi.	 Har	 bir	 idishga	 8	 ta	 urug	 besh	 	ʻ
nusxada	
 ekildi	 va	 25	 ±	 2	 °C	 harorat,	 16	 soatlik	 
yorug lik	
 davri	 va	 40	 µM	 m−2	 s−1	 yorug lik	 	ʻ ʻ
intensivligi	
 ostida	 o sish	 xonasida	 saqlandi.	ʻ   Qora zirk	 ( Berberis integerrima  B)ning	 novdalarini	 ozuqa	 muhitiga	 o’tqazish.
•
Sog lom	
 yashil	 1 yillik	 o simlik	 novdasi	 olinib,	 	ʻ ʻ
mayda	
 bo laklarga	 (taxminan	 5 sm	 uzunlikdagi	 	ʻ
1	
 yoki	 2 bo gimli)	 bo lindi	 va	  indolil	 moy	 	ʻ ʻ
kislata	
 (IMK)	 va	 gibberilin	 garmonlarining	 
turli	
 konsentratsiyasiga	 ega	 bo lgan	 MS	 ozuqa	 	ʻ
muhitiga	
 ko chirildi.	ʻ   O sish	 kamerasi	 	ʻ
sharoitlari  	
yuqorida	 aytib	 o tilgan	 muhit	 bilan	 	ʻ
bir	
 xil	 bo lgan	 o stirish	 xonasida	 saqlandi.	  	ʻ ʻ
Sakkiz	
 hafta	 davomida	 madaniyatdan	 keyin	 
javob	
 bergan	 eksplantlar	 bo yicha	 ma lumotlar	 	ʻ ʼ
yozib	
 borildi. Urug va	 novdadan	 mikroko chatlar	 olish.	ʻ ʻ
•
Inkubatsiya	
 xonasiga	 yorug lik	 va	 qorong ulik	 	ʻ ʻ
bosqichlarida	
 (16/8	 soat)	 saqlandi	 va	 kuzatib	 
borildi.	
 18	 fevral	 kuni	 2 ta	 bonkada	 zamburug	 ʻ
paydo	
 bo ldi.	 Zararlangan	 shisha	 bonkalardagi	 	ʻ
o simliklar	
 laboratoriyadan	 chiqarib	 tashlandi.	 	ʻ
Qolgan	
 3 ta	 shisha	 bonkalarda	 14	 kundan	 
so ng	
 o simlik	 18	 ta	 urug ida	 unish	 kuzatildi.	 	ʻ ʻ ʻ
Ular	
 alohida	 idishga	 antibiotikli	 DKW( Driver	 
and	
 Kuniyuki	 Walnut)	 ozuqasiga	 ko chirib	 	ʻ
o tkazildi.	
  Kirish	 material	 har	 14	 kunda	 	ʻ
qaytadan	
 yangi	 ozuqaga	 4 marotaba	 ekildi.	 
Kirish	
 materialidan	 so ng	 mikroko chatlar	 	ʻ ʻ
olishga	
 erishildi. № BAP ( mg/L) GA3 ( mg/L) Rivojlanish ( %  )
Nazorat	
  0 0 0.00	 ±	 0.00
1 2.0 0 24	
 ±	 0.12
2 4.0 0 36	
 ±	 0.36
3 6.0 0 65.46
 ±	 0.13
4 0 2.0 28.00	
 ±	 0.18
  5 0 4.0 22.05	
 ±	 0.05
6 0 6.0 47.12	
 ±	 0.04 3.1	
 jadval.
B. INTEGERRIMA  	
URUG‘LARINING	 IN	 VITRO	 MUHITIDA	 RIVOJLANISHIGA	 TURLI	 
KONSENTRATSIYALI	
 BAP	 VA	 GA3	 NING	 TA`SIRI № BAP
( mg/L) Kinetin
( mg/L) IMK
( mg/L) Urug‘dan o‘sgan	 mikroklon	 
uzunligi	
 (sm) Novdadan	
 o‘sgan	 mikroklon	 
uzunligi	
 (sm)
Nazorat	
  0 0 0
  0.00	 ±	 0.00   0.00	 ±	 0.00
1 3.0 0 0
3.05	
 ±	 0.11 1.35	 ±	 0.02
2 6.0 0 0
3.46	
 ±	 0.20 2.36	 ±	 0.10
3 9.0 0 0
4.15	
 ±	 0.09 2.85	 ±	 0.28
4 0 3.0 0
2.36	
 ±	 0.10 1.45	 ±	 0.09
5 0 6.0 0
2.85	
 ±	 0.28 2.00	 ±	 0.01
6 0 9.0 0
3.12	
 ±	 0.11 2.70	 ±	 0.06	 
7 0 0 3.0
2.00	
 ±	 0.01 0.59	 ±	 0.09
8 0 0 6.0
2.15	
 ±	 0.14 1.40	 ±	 0.16
9 0 0 9.0
2.36	
 ±	 0.10	  1.45	 ±	 0.09 3.2-jadval.  
B. INTEGERRIMA  	
URUG‘I	 VA	 NOVDASINING	 YON	 APIKAL	 MERISTEMASIDAN	 O‘SGAN	 
MIKROKLONLARGA	
 TURLI	 KONSENTRATSIYADAGI	 BAP,	 KINETIN	 VA	 IMK	 
GARMONLARINING	
 MIKRONOVDA	 UZUNLIGIGA	 TA`SIRI.	  № Au ks in 
turi Konsentratsiya	  
(mg/L) Ildizlangan	 
Mikronovdalar
 
(%) O‘rtacha	
 Ildiz	 
Uzunligi	
 (sm) Ildiz	
 Sifatining	 
Bahosi	
 (1-5) Morfologik	
 Kuzatuvlar
1
IBA 0.5 40 1.2 2 Ingichka	
 ildizlar,	 uzun,	 oqish	 
rangda
2 1.0 65 2.5 3 O‘rtacha	
 qalinlikda	 ildizlar,	 
yaxshi	
 rivojlangan,	 oq
3 1.5 8 0 3. 2 4 Qalin	
 va	 sog‘lom	 ildizlar,	 krem	 
rangda
4 2.0 70 3.0 3 Qisqaroq	
 ildizlar,	 to‘q	 oq	 
rangda
5 2.5 55 2.2 2 Ancha	
 qalin	 ildizlar,	 ildiz	 
uchlari	
 qizarishgan
6
NAA 0.5 30 1.0 2 O‘rtacha	
 qalin,	 oqish	 rangda,	 
o‘sish	
 sust
7 1.0 50 2.0 3 Krem	
 rangda,	 yaxshi	 
rivojlangan,	
 ingichka
8 1.5 60 2.7 4 Qalin	
 ildizlar,	 krem	 rang,	 
mustahkam
9
IAA 0.5 25 0.8 1 Nozik,	
 qisqa,	 oq	 rangda
10 1.0 40 1.5 2 Ingichka,	
 uzunroq,	 oqish
11 1.5 50 2.1 3 O‘rtacha	
 qalin,	 oq	 rangda 3.3.	
 jadval
BERBERIS INTEGERRIMA  	
O‘SIMLIGINING	 MIKRONOVDALARI	 ILDIZ I	 RIVOJLANISHIGA	 TURLI	 
MIQDORDAGI	
 AUXSINLAR	 TA’SIRI . 3.4 jadval
B. INTEGERRIMA NAMUNALARI NING	
 MIKROELEMENTAR	 TAHLILI	 
BargMevaKallus
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 500.0047 00.0035
Br
Zn
Cu
Mn
Fe
Ca
K
Cl
S
P 3.4-rasm.  B. integerrima  	ni	 mikroklonal	 usulda	 ko paytirish	 va	 ikkilamchi	 metabolitlar	 olish	 biotexnologiyasi	 	ʻ
chizmasi XULOSALAR

B. integerrima  ni	 mikroklonal	 ko paytirishda	 urug	 va	 novdalardan	 foydalaniladi.	 Foydalanish	 uchun	 urug lar	 to liq	 	ʻ ʻ ʻ ʻ
pishib	
 yetilgan	 vaqtda	 yig ib	 olinib,	 urug lar	 ma’lum	 vaqt	 tinim	 davrini	 o tashi	 ta’minlanadi.	 Novdalar	 erta	 	ʻ ʻ ʻ
bahorda,	
 yaxshi	 rivojlangan	 va	 o zida	 bir	 nechta	 sog lom	 kurtaklar	 saqlagan	 holda	 olinadi.	ʻ ʻ

Olingan	
 o simlik	 namunalari	 10	 minut	 oqar	 suvda,	 30	 minut	 10%	 domestosda,	 70	 %	 spirtda	 5 daqiqa,	 0,1%	 	ʻ
fungitsidda
 30	 minut,	 0,1%	 AgCl	 da	 5 minut	 sterilizatsiyalash,	 har	 bir	 bosqich	 orasida	  steril	 suvda	 besh	 martadan	 
yuvish	
 orqali	 sterillanadi.

Mikroklonlar
 olishda	  urug	 uchun	 6,0	 mg/l	 BAP	  qo shish	 orqali	 boyitilgan	 MS	 ozuqa	 muhiti,	 novda	 uchun	 9.0	 	ʻ ʻ
mg/l	
 BAP,	 9.0	 mg/l	 kinetin,	 9.0	 mg/l	 IMK	 saqlagan	 MS	 ozuqa	 muhiti	 optimal	 hisoblanadi.

  Eksplantlarni	
 ildizlatish	 1.5	 mg/l	 IBK	 saqlagan	 DKW	 ozuqa	 muhitida	 amalga	 oshiriladi.

B.  integerrima  	
ni	 barg,	 meva	 va	 kallusining	 mikro-	 va	 makroelementlarini	 qiyosiy	 tahlili,	 uning	 kallusi	 ham	 
biologik	
 faol	 moddalar	 olish	 uchun	 manba	 bo lib	 xizmat	 qilishi	 imkoniyatiga	 egaligini	 ko rsatdi.	ʻ ʻ