Modifikatsiyalangan oligonukleitidlarning olinish usullari va qo‘llanilishi - Педагогика - Рефераты

Информация о документе

Цена	2000UZS
Размер	212.4KB
Покупки	0
Дата загрузки	07 Ноябрь 2026
Расширение	docx
Раздел	Рефераты
Предмет	Педагогика

Modifikatsiyalangan oligonukleitidlarning olinish usullari va qo‘llanilishi

Купить

MAVZU: Modifikatsiyalangan oligonukleitidlarning
olinish usullari va qo’llanilishi
REJA:
1. Oligonukleitidlarni ishlatilishi
2. Oligonukletidlarni olinish usullari
3. Oligonukletidlarni qo’lanilishi

Oligonukleotidlar biotexnologiya, molekulyar biologiya, diagnostika va terapiya
kabi sohalarda keng qo'llanilishiga ega. Biroq, ularning tuzilishiga kimyoviy
modifikatsiyalar kiritish orqali foydalanish spektrini kengaytirish mumkin. Yangi
oligonukleotid analoglarini izlashda eng samarali soha antisens strategiyasi bo'lib,
unda kimyoviy modifikatsiyalar gibridlanish, nukleazalarga chidamlilik, hujayralarni
qabul qilish, selektivlik va asosan yaxshi farmakokinetik va farmakodinamik
xususiyatlar kabi tegishli xususiyatlarni beradi. Kombinator texnologiya - bu
oligonukleotidlari va ularning analoglari keng qo'llaniladigan yana bir tadqiqot
yo'nalishi. Aptamerlar, yangi katalitik ribozimlar va deoksiribozimlar ma'lum
xususiyat asosida tasodifiy sintezlangan kutubxonadan individuallashtirilgan RNK
yoki DNK molekulalaridir. Ular PCR texnologiyalaridan foydalangan holda takroriy
tanlash va kuchaytirish davrlari bilan aniqlanadi. O'zgartirilgan nukleotidlar
kuchaytirish jarayonida ham, tanlashdan keyin ham kiritilishi mumkin.
Oligonukleotidlar bir monomerning 3'-gidroksil guruhi va boshqasining 5'-gidroksil

guruhi o'rtasida hosil bo'lgan fosfodiester ko'priklar bilan bog'langan nukleozid
birliklarining bir ipli oligomerlari. Ular, shuningdek, bir zanjirli DNK yoki RNKning
qisqa bo'laklari sifatida belgilanishi mumkin. Tabiiy oligo nukleotidlar genlarni
qurish, tanlash va aniqlash uchun keng qo'llanilgan.
OLIGONUKLEOTIDLARNING QATTIQ FAZALI SINTEZI
Fosforamidatlarning ulanish davri. Zamonaviy Oligonuklotidlar sintezi
avtomatlashtirilgan Oligonukleotidlar sintezator ustunidagi qattiq
tayanchda to'rt bosqichli sikl orqali yakunlanadi.
1-qadam: blokirovkadan chiqarish. sikl odatda 5'OH tritillangan
nukleotid zanjiri bilan boshlanadi. 5'OH ni blokirovka qiluvchi tritil guruhi
chiqariladi. Ushbu blokirovkalash bosqichida odatda DCM yoki boshqa
qutbsiz erituvchida dixloroasetik kislota (DCA) yoki trixlorosirka kislotasi
(TCA) ishlatiladi . Kuchli kislotalarni ishlatadigan yoki uzoq vaqt
davomida sodir bo'ladigan blokirovkalash kimyoviy sintez qilinishi
mumkin bo'lgan Oligonukeotidlarning maksimal uzunligiga ta'sir qiluvchi
cheklovchi omillardan biri bo'lgan depurinatsiyaga olib kelishi mumkin.
2-qadam: ulash. Bloklashdan so'ng, bo'sh 5'OH kerakli ketmaketlikda
keyingi nukleotidga ulanishga tayyor. Odatda, 3'OH ustida 2-siyanoetil
bilan himoyalangan fosforamiditga ega bo'lgan nukleozid birlashtiruvchi
sherik sifatida ishlatiladi. Bog'lanishga kislotali azol yoki shunga o'xshash
birikma kabi aktivator vositachilik qiladi. Azollar va 2-siyanoetil fosfor
amiditlari faollashtirilgan fosfor amiditlarini hosil qilish uchun
qadoqlangan ustunga kirishdan oldin sintezatorning oligonukleotidlar
trubkasida qisqa vaqt ichida aralashtiriladi. Bu aralashtirish fosfor amidit

azotining protonlanishiga yordam beradi va yaxshi tark etuvchi guruh hosil
qiladi. Faollashtirilgan fosforamidat yuqori ulanish samaradorligiga ega
bo'lishi uchun o'sib borayotgan Oligonukleotidlar zanjirlari soniga nisbatan
katta miqdorda bo'lishi kerak. Muvaffaqiyatli ulanish beqaror fosfit
triesterni beradi.
3-qadam: yopish. Ulanishdan so'ng, yaxshi bog'lanmagan zanjirlarning
juda oz miqdori ularning erkin 5'OH guruhlari keyingi fosforamidat
birikmalari bilan reaksiyaga kirishmasligi uchun yopilishi kerak, bu esa n -
1 o'chirishni keltirib chiqaradi, ularni ajratish qiyin bo'ladi. Kerakli
Oligonukleotidlar. Bundan tashqari, guanozinning O6 pozitsiyasi ba'zan,
kamdan-kam hollarda faollashtirilgan
fosforamidatlar bilan reaksiyaga kirishishi mumkin. Yod va suv bilan
oksidlanish ham bu joylarda depurinatsiyaga olib kelishi mumkin. Ushbu
reagentlar qolgan bo'sh 5'OHlarni asillashtiradi, bu esa bu zanjirlarning
o'sishiga to'sqinlik qiladi va O6 guanozin fosforamidit modifikatsiyasini
olib tashlaydi.
4-qadam: Oksidlanish. Fosfit triesterlari fosfat triesterlariga
oksidlanishi kerak. Bu zaif asos mavjud bo'lganda suvda yod bilan amalga
oshiriladi. TBHP va boshqa reagentlar suvsiz erituvchilarda oksidlanish
uchun ishlatilishi mumkin. Himoyadan mahrum qilish va bo'linish. Oldingi
to'rtta qadam kerakli ketma-ketlikka erishilgunga qadar takrorlanadi.
Oligonukleotidlar 5'OHda DMT bilan qoldirilishi mumkin yoki ular
nukleozid bo'lmagan fosforamidit bilan qoplanishi mumkin. Bu
fosforamidit kerakli xususiyatlarga ko'ra gidrofilik, gidrofobik, UV faol
yoki hatto biotin kabi biologik faol qism bo'lishi mumkin. Fosfat
triesterlari va har qanday N-atsil bilan himoyalangan asoslar

oligonukletidlar qattiq tayanchdan ajratilganda himoyadan chiqariladi. Bu
erkin ONni berish uchun metil amin kabi asos bilan amalga oshiriladi.
Keyin oligonukletidlar tozalanadi va tavsiflanadi.
Enzimatik bog'lanish
Qisqa oligonukleotidlarni bog'lash uchun fermentativ yondashuv uzoq
deoksinuklein va ribonuklein kislotalarni sintez qilish uchun jozibali yo'lni
taklif qiladi. Ushbu reaktsiyalar fosfodiester bog'lanish hosil qilish orqali
oligonükleotidlarning 5' va 3' uchlarini molekulalararo bog'lanishiga
yordam beradigan DNK yoki RNK ligazalari tomonidan katalizlanadi .
DNK ligaza holatida ikkita oligodeoksinukleotid, biri 5' -fosforil donor
guruhiga, ikkinchisi esa erkin 3'- gidroksil qabul qiluvchiga ega bo'lgan
holda, substratga bo'lgan ehtiyojni tashkil qiladi. Fosforlangan va gidroksil

uchli oligonukleotidlar homo-(DNK:DNK) yoki geteroduplekslarda
(DNK:RNK) mavjud bo'lishi muhim. Terminal lyuminestsent va
xemiluminesans belgilariga ega bo'lgan oligonukleotidlar DNK ligaza
uchun substrat sifatida ham harakat qilishi mumkin. Bunday o'zgartirilgan
oligomerlar gibridizatsiya-ligatsiya
tahlillarida kistafibroz gen mutatsiyalarini o'rganish uchun muvaffaqiyatli
qo'llanilgan
Tabiiy bo'lmagan nukleotidlarning fermentativ qo'shilishi
O'zgartirilgan asoslar, shakar yoki fosfat guruhlari bo'lgan
oligonukleotidlarning fermentativ sintezi kimyoviy sintezga munosib
alternativ hisoblanadi. O'zgartirilgan nukleozid trifosfatlarning T7 yoki
shunga o'xshash fag RNK polimeraza bilan fermentativ birikmasi, ayniqsa,
polimeraza uchun yaxshi substrat bo'lsa, shablonga yo'naltirilgan
transkripsiya reaktsiyalari uchun juda mos keladi. Bu talab transkripsiya
reaktsiyalarida ishlatilishi mumkin bo'lgan o'zgartirilgan nukleotidlar
sonini cheklaydi; shuning uchun oligoribonukleotidlarga faqat bir
nechta modifikatsiyalar enzimatik tarzda kiritilishi mumkin.
Oligodeoksinukleotidlar uchun bu modifikasiyalar Escherichia coli DNK
polimeraza I ning Klenow fragmenti kabi DNK polimeraza yordamida
shablonga tavlangan primerning zanjir kengayishi orqali amalga oshirilishi
kerak.
Oligonukleotidlarning postsintetik modifikatsiyasi
Oligonukleotidlarning boshqa biologik makromolekulalar, radioaktiv
bo'lmagan reportyorlar guruhlari, spin yorliqlari va o'zaro bog'lovchi
moddalarga konjugatsiyasi postsintetik modifikatsiyalash jarayonlarini
ishlab chiqish zaruratini tug'dirdi.

O'zgartirilgan oligonukleotidlararo nukleotid bog'lanishlar.
Bu reaksiyalarning barchasi parchalanish joyida mavjud bo'lgan
fosfor konfiguratsiyasining inversiyasi bilan davom etadi.
Alohida bosqichlarda fosforotioatlarga qo'yiladigan
stereokimyoviy talablarni taqqoslash turli xil biriktiruvchi
tizimlar uchun o'xshashliklarni aniqlash imkonini beradi. Ushbu
tahlil mRNK oldidan qo'shilish va II guruhni biriktirish
reaktsiyasi o'rtasidagi yaqin aloqani ta'kidlaydi. Fosfor
markazida konfiguratsiyaning teskari o'zgarishi, shuningdek,

bolg'acha boshi ribozim vositachiligidagi kataliz uchun ham
xabar qilingan, bu rentgen tuzilmalarida aniq bo'lmagan chiziqli
mexanizmni ko'rsatadi. Boshqa bir tadqiqotda, bakteriofag
lambda rekombinatsiyasida ishtirok etgan ikkita ipdan birida
fosforotioat o'rnini bosish kesishuvni boshlash uchun iplarni
tanlashda kuchli tarafkashlikni ko'rsatdi.
Kimyoviy modifikatsiyalangan oligonukleotidlar ko'plab
biokimyoviy reaktsiyalar va jarayonlarning mexanik va
stereokimyoviy jihatlarini tushunishda juda foydali bo'ldi.
Kimyogarlarning tasavvuri va qobiliyati kelajakda aniq
savollarga javob berish uchun maxsus ishlab chiqarilgan
nukleozid analoglarini sintez qilishni ta'minlaydi. Biroq, nuklein
kislotalarga fermentativ ravishda qo'shilishi mumkin bo'lgan
nukleotid analoglari arsenalini kengaytirish uchun haqiqiy
qiyinchilik mavjud.
O'zgartirilgan holat yangilanishi. Kimyoterapiya uchun
oligonukleotidlar
Kimyoviy modifikatsiyalangan oliogonukleotidlarning terapevtik
qo’llanmalari bo’yicha so’nggi ishlanmalar va klinik
taraqqiyotning yangilanishi keltirilgan. So'nggi o'n yil ichida
klinik sinovlarda terapevtik oligonukleotidlar soni qariyb uch
barobar oshdi. Bu birinchi navbatda, sintez protokollaridagi
yutuqlar, biologiyani yaxshiroq tushunish, takomillashtirilgan
etkazib berish va yaxshi formulalash texnologiyalari bilan

bog'liq. Hozirgi vaqtda Amerika Qo'shma Shtatlarida hayotga
xavf tug'diradigan turli
kasalliklarni davolash uchun oligonukleotidlarga asoslangan
dorilar bilan 100 dan ortiq klinik sinovlar davom etmoqda. Turli
oligonukleotidlar orasida antisens texnologiyasi bozorda bitta
mahsulot bilan birinchi o'rinda turadi. Antisens texnologiyalari
faol klinik sinovlarning yarmini tashkil qiladi. Xuddi shunday,
siRNK, aptamerlar, shpigelmerlar mikroRNK, shRNK, IMO va
CpG oligonukleotidlarning boshqa faol sinflari bo'lib, ular ham
klinik sinovlardan o'tmoqda. Ushbu sharhda sintez kimyoviy
modifikatsiyalar, tozalash va tahlilning hozirgi holatini
terapevtik usul sifatida ko'rib chiqilayotgan ko'plab
oligonukleotidlar bilan tez rivojlanish nuqtai nazaridan
umumlashtirishga harakat qiladi.

FOYDALANILGAN ADABIYOTLAR
1. Gallo M., Montserrat J. M., Iribarren A. M. Design and applications
of modified oligonucleotides //Brazilian journal of medical and biological
research. – 2003. – Т . 36. – С . 143-151 .
2. Glazier D. A. et al. Chemical synthesis and biological application of
modified oligonucleotides //Bioconjugate Chemistry. – 2020. – Т . 31. –
№. 5. – С. 1213-1233.
3. Sanghvi Y. S. A status update of modified oligonucleotides for
chemotherapeutics applications //Current protocols in nucleic acid
chemistry. – 2011. – Т . 46. – №. 1. – С . 4.1. 1-4.1. 22. DOI:
10.1002/0471142700.nc0401s46
4. Venkatesan N., Kim S. J., Kim B. H. Novel phosphoramidite
building blocks in synthesis and applications toward modified
oligonucleotides //Current medicinal chemistry. – 2003. – Т . 10. – №. 19.
– С. 1973-1991 .

Modifikatsiyalangan oligonukleitidlarning olinish usullari va qo‘llanilishi

Купить

Похожие документы
2001-yil sentabr voqealri va uning xalqaro munosabatlarga
1945-1990-yillarda Buyuk Britaniya
1918-1923 yillarda xalqaro munosabatlar, Versal Vashington siyetemasining tuzilishi
Ahmad al-farg‘oniy
Almashlab ekishni loyihalashtirish va joriy etish